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色譜柱|高效液相柱|手性柱|氣相柱|SPE|制備柱

  • 8種常見液相色譜峰解析的分析

  • 發(fā)布日期：2019-11-19    作者：分析測試百科網(wǎng) 瀏覽量：    字號：[ 大 中 小]


1、拖尾峰

1、篩板阻塞：柱子兩頭的過濾篩板如果堵塞，樣品就會在篩板部分受阻而形成時間延遲，使得樣品在柱后流出時峰型形成拖尾。需要通過反沖色譜柱，或者更換篩板。
2、色譜柱塌陷：是指色譜柱由于其它原因引起了柱效率喪失，不能對物質(zhì)形成保留，使得物質(zhì)不在固定相上保留而隨流動相流出，但是又還有一點柱效，因此形成拖尾。需要重新填充色譜柱或者更換色譜柱。
3、有污染：即樣品不在同一起跑線起跑，從后面開始跑得到達終點稍晚，表現(xiàn)出拖尾。更換色譜柱或者采用有機溶劑梯度洗脫1h以上，以沖洗柱子。
4、流動相PH值選擇錯誤：如某PH下有的樣品存在分子型和離子型的動態(tài)平衡，離子型的陸續(xù)向分子型轉(zhuǎn)化就會表現(xiàn)出拖尾。調(diào)節(jié)PH值可抑制分子解離，改善拖尾，對于堿性化合物，相對較低的PH值更有利于得到對稱峰。
2、前沿峰
1、樣品過載：被保留的樣品在正常出峰時間前陸續(xù)出來，形成前沿峰。降低樣品含量。
2、樣品溶劑選擇不恰當：當樣品溶劑的洗脫能力大大強于流動相時會出現(xiàn)前沿峰，例如，在反相色譜中用已腈做樣品溶劑，而流動相的洗脫力較弱時會出現(xiàn)前沿峰。選擇流動相或者接近流動相的比例作為樣品溶劑。
3、色譜柱損壞：色譜柱柱效損失，不能對物質(zhì)形成保留。更換色譜柱。
4、在大峰前有小峰出現(xiàn)，假象前沿峰，即大峰前包埋了沒有分開的小峰。調(diào)整流動相洗脫梯度。

3、倒峰
1、樣品折射率小：示差折光檢測器測的信號是折射率，出現(xiàn)倒峰的原因是組分的折射率小于流動相。

2、密度的原因：密度不一樣，出來的峰正倒不一樣。

3、進樣所致：進樣時，樣品對原有流動相產(chǎn)生瞬間阻斷，然后瞬間涌流，所以產(chǎn)生先倒后高的“溶劑峰”。

4、基本不可避免：試著使用與流動相相同的溶劑作為溶樣溶劑，另外進樣之前注意平衡跟沖洗參比池。倒峰基本上不能避免，但是這樣操作會小些。


4、包裹


1、色譜柱問題：色譜柱流失，柱子被污染。

2、樣品溶解度差：溫度可能會影響到溶解度。

3、流動相不均勻：一般是流動相沒配好，管路流動相不均勻，也會導致上述現(xiàn)象。


5、基線漂移
1、柱溫波動：即使是很小的溫度變化都會引起基線的波動，通常影響示差檢測器、電導檢測器、較低靈敏度的紫外檢測器或其它光電類檢測器。使用柱溫箱，控制好柱子和流動相的溫度，在檢測器之前使用熱交換器。
2、流動相不均勻：流動相條件變化引起的基線漂移大于溫度導致的漂移。使用HPLC級的溶劑，流動相在使用前進行脫氣處理。
3、流通池被污染或有氣體：用甲醇或其他強極性溶劑沖洗流通池。如有需要，可以用1N的硝酸(不要用鹽酸)。
4、流動相配比不當或流速變化：更改配比或流速，為避免這個問題可定期檢查流動相組成及流速。
5、樣品中有強保留的物質(zhì)：以饅頭峰樣被洗脫出，從而表現(xiàn)出一個逐步升高的基線。使用保護柱，如有必要，在進樣之間或在分析過程中，定期用強溶劑沖洗柱子。
6、出現(xiàn)寬峰
1、色譜柱污染或失效，造成塔板數(shù)降低：更換同樣類型的色譜柱，如果新柱子可以提供對稱的色譜峰，則用強溶劑沖洗舊柱子。
2、柱子與檢測器之間的管路太長或管路內(nèi)徑太大：更換內(nèi)徑較小的短管路。
3、檢測器對反應時間或池體積響應過大：減少響應時間或使用更小的流通池。

7、基線噪音
1、在流動相、檢測器或泵中有空氣(尖銳峰)：流動相脫氣，沖洗系統(tǒng)以除去檢測器或泵中的空氣。
2、漏液：檢查管路接頭是否松動，泵是否漏液，是否有鹽析出和不正常的噪音。如有必要，更換泵密封。
3、流動相混合不完全：用手搖動使混合均勻或使用低粘度的溶劑。
4、溫度影響(柱溫過高，檢測器未加熱)：使用柱溫箱，減少溫度差異或加上熱交換器。
5、在同一條線上有其他電子設備(偶然噪聲)：斷開LC、檢測器和記錄儀，檢查干擾是否來自于外部，加以更正。采用精密級穩(wěn)壓電源。
8、分離度不夠
1、流動相梯度洗脫設置不合理：優(yōu)化梯度洗脫程序。
2、流動相污染或變質(zhì)(引起保留時間變化)：重新配置流動相。
3、保護柱或分析柱阻塞：去掉保護柱進行分析，如果必要則更換保護柱；如果分析柱阻塞，可進行反沖；如果問題仍然存在色譜柱可能被強保留的污染物損壞，建議使用恰當?shù)脑偕绦颍?/span>如果問題仍然存在，進口可能阻塞了，更換入口處的篩板或更換色譜柱。
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